本发明提出了一种测定蛋白质的唾液酸含量的方法，该方法包括：(1)利用唾液酸酶对蛋白质样品进行消化处理，以便获得含有唾液酸的消化液；(2)对所述消化液进行沉淀处理，并分离含有所述唾液酸的上清液；(3)通过超高效液相色谱‑质谱法对所述上清进行分析，以便获得质谱图；以及(4)基于所述质谱图，确定所述蛋白质的唾液酸含量。本发明实施例所提出的方法，在无需对唾液酸进行衍生化的条件下，对蛋白样品中的总唾液酸含量进行快速定量检测，方法操作简单，灵敏度高，准确度高，耗时短，可以用于生物大分子生产的中间质量控制或者最终产品的质量检验。1.一种测定蛋白质的唾液酸含量的方法，其特征在于，包括：(1)利用唾液酸酶对蛋白质样品在37℃下进行1～12h消化处理，以便获得含有唾液酸的消化液；(2)所述消化液与乙腈在-20℃的条件下进行接触并对所述消化液进行沉淀处理，并通过离心分离含有所述唾液酸的上清液，其中，所述乙腈预先在-20℃的条件下预冷1h，所述消化液与所述乙腈的体积比是1:3；(3)通过超高效液相色谱-质谱法对所述上清液进行分析，以便获得质谱图；以及(4)基于所述质谱图，确定所述蛋白质的唾液酸含量；其中，所述超高效液相色谱采用下列条件：色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18，所述色谱柱的粒径是1.7微米，大小是2.1*50mm，柱温为30℃，样品室温度为10℃，进样量1微升，流动相的A相为0.1％氨水/水溶液，流动相的B相为乙腈，洗脱程序是0～2min，90％A；2～4min，20％A；4～6min,90％A；所述质谱采用下列条件：负离子扫描模式，离子源温度为150℃，毛细管电压为2.5kV，锥孔电压为12V，脱溶剂温度为450℃，碰撞能量为18eV，离子采集方式为多反应检测模式，采集离子为母离子308.7，子离子87.02。